第六节　生殖系统分泌物检验

实验二十　阴道分泌物检验

【实验目的】掌握阴道分泌物理学检验的内容和方法；掌握显微镜检验的内容和方法。

【实验原理】通过理学方法对新鲜阴道分泌物进行检查，观察其颜色与性状，检测其pH值。应用显微镜对阴道分泌物湿片和染色涂片进行检查，观察其清洁度和有无病原体及细胞等。

【实验材料】

1.器材　消毒棉拭子、精密pH试纸、消毒棉签、试管、载玻片、显微镜。

2.试剂　生理盐水、10%KOH溶液、革兰染液。

3.标本　新鲜阴道分泌物。

【实验操作】

1.外观观察　肉眼仔细观察阴道分泌物的颜色和性状，并报告。颜色以无色、红色、黄色或黄绿色等表示；性状以透明黏性、脓性、血性、水样、奶油状或豆腐渣样等表示。

2.测定酸碱度　用pH试纸检测阴道分泌物的酸碱度，记录其pH值，并报告。

3.制备涂片　取阴道分泌物适量，滴加1滴生理盐水，制备涂片，加盖玻片。

4.阴道清洁度检查　低倍镜观察整个涂片的细胞等有形成分的分布情况，再用高倍镜检查，根据上皮细胞、白细胞（或脓细胞）、杆菌、球菌的数量，按照阴道清洁度分级标准（表1-7）来判断阴道分泌物清洁度，并以“Ⅰ～Ⅳ”方式报告结果。

5.其他病原体检查　观察有无滴虫、真菌、线索细胞和其他病原体，若发现应报告。

【参考区间】无色稀稠状；pH值4.0～4.5；清洁度Ⅰ～Ⅱ度；无滴虫；无真菌；无致病菌和特殊细胞。

【注意事项】

1.标本采集　标本采集前24小时，禁止性交、盆浴、阴道灌洗及局部用药等，以免影响检查结果。

2.器材和试剂　取材用的棉拭子、消毒刮板等必须清洁干燥，不黏有任何化学药品、润滑剂等，生理盐水务必新鲜配制。

3.取材　根据不同的检查目的选择合适的取材部位。一般采用生理盐水浸润的棉拭子自阴道的后部、宫颈管口等处取材。

4.送检　取材后及时送检，防止污染，滴虫检查时应注意保温。

5.检查　检查时涂片应均匀平铺，不能聚集成滴状；滴虫检查涂片时避免在载玻片上做过多的来回搅动，防止损伤毛滴虫的鞭毛。注意观察速度以防涂膜干燥。为了提高滴虫、真菌的阳性检出率，滴虫可采用生理盐水悬滴法检查，真菌可采用低速离心浓集法检查。

6.染色　湿片检查阴性时，应再做革兰或Wright染色，一次阴性不能排除诊断。

【临床意义】阴道清洁度达到Ⅲ或Ⅳ度时，多数情况下可诊断为阴道炎。阴道分泌物病原体检查阳性多见于阴道炎，找到病原体可作为诊断依据。

【思考题】

1.阴道分泌物的性状和颜色可有哪些异常改变？其临床意义是什么？

2.阴道杆菌、真菌、滴虫在显微镜下有何形态特征？

实验二十一　精液检验

（一）精液理学检验

【实验目的】掌握精液理学检验的内容和方法。

【实验原理】通过理学方法检查精液的颜色、透明度、量、黏稠度和液化时间，并检测其pH值。

【实验材料】

1.器材　一次性有刻度的精液专用量杯、滴管、37℃温箱、pH试纸、计时器。

2.标本　新鲜精液。

【实验操作】

1.外观　取刚排出的精液，肉眼观察其颜色和透明度。

2.黏稠度检测　①滴管法：用Pasteur滴管小心吸入液化精液，随后让精液依靠重力自然滴落，并观察其拉丝长度。②玻璃棒法：将玻璃棒插入完全液化的精液后提起，观察提棒时拉起的精液黏丝长度。

3.液化时间测定　刚排出的精液因稠厚，一般难以吸入吸管，将其置于37℃水浴箱内，每隔5～10分钟用口径较细的滴管吸取精液，若精液很容易被吸取且未见未完全液化的精液条索，停止计时，记录时间。

4.精液量和酸碱度　待精液液化后，观测精液的量，并用精密pH试纸测定其酸碱度，记录结果。

【参考区间】

1.量　每次射精2～6mL。

2.颜色和透明度　刚射出的精液呈灰白色或乳白色，不透明；久未射精者的精液可略带淡黄色。精液液化后呈半透明，稍有混浊。

3.液化时间　完全液化时间＜60分钟。

4.黏稠度　①滴管法：呈水样，形成不连续小滴，液滴长度＜2cm。②玻璃棒法：黏丝长度＜2cm。

5.酸碱度　pH值7.2～8.0。

【注意事项】

1.标本　收集全部精液，并在采样后30分钟内送检，送检温度应在20～40℃。

2.检测时间　精液pH测定应在射精后1小时内完成，精液放置时间过长，可致其pH值下降。

3.液化时间　精液黏稠度检测应在精液完全液化后进行。

（二）精液显微镜检查

精子计数

【实验目的】掌握精液计数的方法和应用。

【实验原理】新鲜液化精液经精子稀释液稀释后，充入改良牛鲍血细胞计数板，显微镜下计数一定范围内的精子数，再换算成每升精液中的精子数。

【实验材料】

1.器材　干脱脂棉、小试管、刻度吸管、吸耳球、微量吸管、改良牛鲍血细胞计数板、盖玻片、显微镜。

2.试剂　精子稀释液（碳酸氢钠5.0g，40%甲醛1mL，加蒸储水至100mL，混匀，待完全溶解过滤后备用）。

3.标本　新鲜精液。

【实验操作】

1.稀释精液　于小试管内加入精液稀释液0.38mL，再加入充分混匀的液化精液20μL，立即混匀。

2.充池　取充分混匀的稀释精液1滴充入计数板计数室内，静置2～3分钟。

3.镜检计数　高倍镜下计数室中央大方格内四角及中央共5个中方格内的精子数N。

4.计算　精子计数（/L）=N×5×10×20×106

精子总数=精子计数（/L）×精液量（mL）×10-3

【参考区间】精子计数≥20×109/L；精子总数≥40×106/次射精。

【注意事项】

1.标本　精液标本必须完全液化。吸取前必须充分混匀标本，吸取量必须准确。

2.计数　计数时以精子头部为基准，应计数结构完整的精子（有头和尾），有缺陷的精子（无头或尾）不计数在内，若数量多时应分开计数并记录。

3.检查次数　精子数量变异较大，最好在2～3个月内间隔2～3周分别取3份或以上的精液检查，方能得出较准确结果。

4.离心检查　若直接涂片检查未发现精子，应将精液标本离心后取沉淀物再检查，若仍无精子，才可报告“无精子”。

【思考题】

1.试述精子计数的注意事项。

2.简述精子稀释液的组成成分及其作用。

精子形态检查（改良巴氏染色法）

【实验目的】掌握精子形态检查的方法和应用。

【实验原理】将液化精液涂成薄片，经干燥和固定后进行巴氏染色，油镜下观察计数200个精子，计算正常形态精子百分率；观察有无异常精子，辨别其类型并计算异常精子百分率及各种异常类型的百分率。

【实验材料】

1.器材　染色缸、载玻片、显微镜、香柏油。

2.试剂　巴氏染液、精子固定液（无水乙醇∶乙醚为1∶1的混合液）。

3.标本　新鲜精液。

【实验操作】

1.涂片　取液化精液1滴（约10μL）于载玻片上，采用压拉涂片或推片法制片，待干。

2.固定　将涂片置于乙醇乙醚混合液固定5～15分钟。

3.染色　进行巴氏染色。

4.显微镜检查　油镜下观察至少200个精子，计数正常与异常形态的精子数量及其百分率。

5.结果判断　精子头部顶体染成淡蓝色，顶体后区域染成深蓝色，中段染成淡红色，尾部染成蓝色或淡红色，胞质小滴位于头部后面或中段呈绿色。

【参考区间】正常形态精子＞30%。

【注意事项】

1.制备涂片　若精子数＞10×109/L，可直接涂片检查；若精子数＜10×109/L，则应将精液2000rpm离心10～15分钟后，取沉淀物涂片检查。

2.制片　涂片厚薄应适宜，以免影响着色、透明效果。

3.异常精子　评价精子形态时，只有头、颈和尾部都正常的精子才正常，所有形态学处于临界状态的精子均列为异常。形态学异常的精子若有多种异常同时存在，只需记录1种，应先记录头部异常，其次记录颈和中段异常，最后记录尾部异常。游离的精子头作为形态异常精子计数，但游离的精子尾不计入。卷尾与精子衰老有关。衰老的精子体部也可膨大并有被膜，不宜列入形态异常精子。

4.显微镜观察　在观察精子形态的同时应注意观察有无红细胞、白细胞、上皮细胞和肿瘤细胞等。注意观察有无未成熟的生精细胞，若发现，应计数200个生精细胞（包括精子），计算其未成熟生精细胞百分率。

【思考题】

1.简述精子形态检查的注意事项。

2.导致精子形态异常的因素可能有哪些？

精子活动率、存活率和活动力检查

【实验目的】掌握精子活动率、精子存活率、精子活动力的检查方法。

【实验原理】将液化精液滴于载玻片上并用伊红Y染色，在显微镜下观察精子的活动情况及着色精子和不着色精子的情况，计算精子活动率及活力。

【实验材料】

1.器材　显微镜、载玻片、盖玻片、玻棒或滴管。

2.试剂　5g/L伊红Y染色液（伊红Y5.0g，加9g/L生理盐水溶液至1000mL）。

【实验操作】

1.精子活动率　取完全液化精液1滴于载玻片上，加盖玻片，静置1分钟，在高倍镜下观察100个精子，计数有尾部活动的精子数，并计算其百分率。

2.精子存活率　取液化精液和伊红Y染色液各10滴于载玻片上，混匀，加盖玻片，放置30秒。高倍镜下观察5～10个视野，计数200个精子，计算不着色精子（活精子）的百分率，并报告结果。

3.精子活力　取液化精液1滴于载玻片上，加盖玻片，静置后高倍镜下观察至少5个视野，对200个精子进行分级、计数。依据WHO精子活动力分级，将精子活动力分为3级（表1-8），即前向运动（progressive motility，PR）、非前向运动（nonprogressive motility，NP）和无运动（immotility，IM）。

【参考区间】排精后60分钟内，精子活动率为80%～90%（至少＞60%）。总活动力（PR+NP）≥40%，前向运动（PR）≥32%。

【临床意义】精液液化异常及精子数、精子活动力、精子活动率等任何异常都可影响男性生育能力，但不育症的诊断需结合各个检查项目结果综合评估。

【注意事项】

1.标本采集　禁止采用安全套法采集精液标本，因安全套内含有杀精剂等对精子有害的物质。

2.送检　标本应在排精后30分钟内送检；送检和检查时应注意保温。

3.操作　检查用的精液量及盖玻片大小应当标准化，以保证分析的一致性。建议采用精液分析计数的专用工具，如Makler计数板。

【思考题】影响精子活动力和活动率的因素可能有哪些？

实验二十二　前列腺液检验

【实验目的】掌握前列腺液理学检验及显微镜检验的内容和方法。

【实验原理】理学检验新鲜前列腺液的颜色、性状、pH值等；涂片后显微镜下观察其有形成分的种类和数量。

【实验材料】

1.器材　精密pH试纸、载玻片、盖玻片、显微镜。

2.试剂　乙醚乙醇固定液（乙醚49.5mL、95%乙醇49.5mL和冰乙酸1mL混匀）、Wright-Giemsa染液、HE染液或巴氏染液。

3.标本　新鲜前列腺液。

【实验操作】

1.观察外观　取新鲜前列腺液1滴于载玻片上，肉眼观察其颜色、性状。

2.测定pH值　用精密pH试纸测定前列腺液的酸碱度，并记录其pH值。

3.直接涂片法

（1）制备涂片　取新鲜前列腺液1滴于载玻片上，加盖玻片。

（2）显微镜观察　低倍镜下观察涂片及有形成分的分布情况；高倍镜下连续观察10个视野内有形成分的种类、形态和数量，并报告结果。

（3）报告方式　①磷脂酰胆碱小体：按照“+～++++”方式报告（+：占高倍视野1/4；++：占高倍视野1/2；+++：占高倍视野3/4；++++：高倍镜下满视野均匀分布），若未发现磷脂酰胆碱小体则报告为“未见磷脂酰胆碱小体”。②细胞：白细胞、红细胞、前列腺颗粒细胞均按照“X个/HP”方式报告。

4.涂片染色法

（1）固定涂片　将常规制备的前列腺液涂片，干燥后置于乙醚乙醇固定液中固定10分钟。

（2）染色　自然干燥后，根据检查目的的不同，进行染色。

（3）显微镜观察　在高倍镜下观察各种细胞成分及其形态变化（特别是肿瘤细胞）。

【参考区间】淡乳白色，有蛋白光泽；稀薄；pH值6.3～6.5；磷脂酰胆碱小体满视野/HP；白细胞＜10/HP；红细胞偶见，＜5/HP；前列腺颗粒细胞＜1/HP。

【注意事项】

1.标本采集前　检查前72小时内应避免性生活。

2.标本采集时　采集标本时，应弃去尿道流出的第一滴液体。如采集未成功时，可重复按摩一次，但不可强求收集。

3.标本采集后　标本采集后应立即送检，以免干涸。

4.显微镜检查　观察时，先用低倍镜浏览全片，再换用高倍镜，至少应观察10个高倍视野。

【临床意义】前列腺液检查异常可用于诊断前列腺炎、前列腺癌等疾病。

【思考题】

1.简述前列腺液理学检验的临床意义。

2.简述前列腺液检验的临床意义。

（徐红俊）