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实训15 人参的鉴定
【实训目标】
熟练掌握人参的性状、显微及理化鉴别方法;学会依据国家药品标准,综合鉴定人参的真伪优劣;学会书写检验报告书。
【实训准备】 1.实训材料
人参为五加科植物人参 Panax ginseng C. A. Mey.的干燥根。人参药材、红参药材、高丽参药材、人参粉末、人参永久制片、人参皂苷Rb 1对照品、人参皂苷Re对照品、人参皂苷Rf对照品、人参皂苷Rg 1对照品等。
2.实训器具
显微镜、培养皿、毛笔、刀片、酒精灯、高效液相色谱仪、回流提取装置、超声处理仪、标准药筛筛、分析天平、索氏提取器、紫外光灯、100ml锥形瓶、蒸发皿、5ml量瓶、硅胶G薄层板、展开缸等。
3.实训试剂
稀甘油、甘油醋酸试液、水合氯醛试液、三氯甲烷、正丁醇、氨试液、甲醇、乙酸乙酯、甲醇、10%硫酸乙醇溶液、十八烷基硅烷键合硅胶、乙腈等。
【实训内容及步骤】 1.性状鉴别 (1)园参:
主根呈纺锤形或圆柱形,长3~15cm,直径1~2cm。表面灰黄色,上部或全体有疏浅断续的粗横纹及明显的纵皱纹,下部有支根2~3条,并着生多数细长的须根,须根上常有不明显的细小疣状突起。根茎(芦头)长1~4cm,直径0. 3~1. 5cm,多拘挛而弯曲,具不定根(艼)和稀疏的凹窝状茎痕(芦碗)。质较硬,断面淡黄白色,显粉性,形成层环纹棕黄色,皮部有黄棕色的点状树脂道及放射状裂隙。香气特异,味微苦、甘。
(2)林下山参:
主根多与根茎等长或较短,呈圆柱形、菱角形或人字形,长1~6cm。表面灰黄色,具纵皱纹,上部或中下部有环纹,习称“铁线纹”。支根多为2~3条,须根少而细长,清晰不乱,有较明显的疣状突起,习称“珍珠疙瘩”。根茎细长,少数粗短,中、上部具稀疏或密集而深陷的茎痕;不定根较细,多下垂。
(3)红参:
主根呈纺锤形、圆柱形或扁方柱形,长3~10cm,直径1~2cm;表面红棕色,半透明,偶有不透明的暗黄褐色斑块,具纵沟、皱纹及细根痕;上部有时具断续的不明显环纹,下部有2~3条扭曲交叉的支根;根茎(芦头)上有数个凹窝状茎痕(芦碗),有的带有1~2条完整或折断的不定根(艼);质硬而脆,折断面平坦,角质样;气微香而特异,味甘、微苦。
(4)高丽参:
呈长柱状,上半部均压制成不规则的方柱形,长7~16cm,直径1~2cm;表面黄棕色至红棕色(指主根的上部常呈黄棕色,习称“着黄袍”;下部呈红棕色,习称“红裤腿”),有光泽,略透明,皮细腻显油润;根茎(参芦)短而粗,有的具两个参芦(称蝴蝶芦),参芦的茎痕(芦碗)大,略似碗状;根的上部有横环纹,中下部有纵皱和少数浅纵沟,底端下部支根(参腿)1~3支,稀有4支,较粗;质坚重,不易折断,断面较平坦,红棕色,有光泽,呈角质,形成层色淡;气香特异,味微苦后甘甜。
2.显微鉴别 (1)人参主根横切面:
①木栓层为数列细胞,栓内层窄。②韧皮部外侧有裂隙,内侧薄壁细胞排列较紧密,有树脂道散在,内含黄色分泌物。③形成层成环。④木质部射线宽广,导管单个散在或数个相聚,断续排列成放射状,导管旁偶有非木化的纤维。⑤薄壁细胞含草酸钙簇晶。
(2)人参(生晒参)粉末:
淡黄白色。①树脂道碎片:内含黄色块状分泌物。②草酸钙簇晶:直径20~68μm,棱角锐尖。③木栓细胞:表面观呈类方形或多角形,壁细波状弯曲。④导管:多网纹或梯纹,稀有螺纹,直径10~56μm。⑤淀粉粒:甚多,单粒类球形、半圆形或不规则多角形,直径4~20μm,脐点点状或裂缝状;复粒由2~6个分粒组成。
3.理化鉴别 (1)薄层色谱:
①供试品溶液的制备:取本品粉末1g,加三氯甲烷40ml,加热回流1小时,弃去三氯甲烷液,药渣挥干溶剂,加水0. 5ml拌匀湿润,加水饱和正丁醇10ml,超声处理30分钟,吸取上清液,加3倍量氨试液,摇匀,放置分层,取上层液蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为供试品溶液。②对照药材溶液的制备:取人参对照药材1g,同法制成对照药材溶液。③对照品溶液的制备:取人参皂苷Rb 1、Re、Rf及Rg 1对照品,加甲醇制成每1ml各含2mg的混合溶液,作为对照品溶液。④薄层色谱试验:吸取上述三种溶液各1~2μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水(15∶40∶22∶10)10℃以下放置的下层溶液为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,在105℃加热至斑点显色清晰,分别置日光及紫外光灯(365nm)下检视。⑤结果判断:供试品色谱中,在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上,分别应显相同颜色的斑点或荧光斑点。
(2)检查:
水分(以烘干法测定)不得过12. 0%;总灰分不得过5. 0%。
(3)含量测定(示教):
按高效液相色谱法测定。①色谱条件与系统适用性试验:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以乙腈为流动相A,以水为流动相B,按表2- 3中的规定进行梯度洗脱;检测波长为203nm;理论板数按人参皂苷Rg 1峰计算应不低于6000。②对照品溶液的制备:精密称取人参皂苷Rg 1、人参皂苷Re及人参皂苷Rb 1三种对照品,加甲醇制成每1ml各含0. 2mg的混合溶液,摇匀,即得。③供试品溶液的制备:取本品粉末(过四号筛)约1g,精密称定,置索氏提取器中,加三氯甲烷加热回流3小时,弃去三氯甲烷液,药渣挥干溶剂,连同滤纸筒移入100ml锥形瓶中,精密加水饱和正丁醇50ml,密塞,放置过夜,超声处理(功率250W,频率50kHz)30分钟,滤过,弃去初滤液,精密量取续滤液25ml,置蒸发皿中蒸干,残渣加甲醇溶液并转移至5ml量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,滤过,取续滤液,即得。④测定:分别精密吸取对照品溶液10μl与供试品溶液10~20μl,注入液相色谱仪,测定,即得。⑤结果判断:本品以干燥品计算,含人参皂苷Rg 1(C 42H 72O 14)和人参皂苷Re(C 48H 82O 18)的总量不得少于0. 30%;人参皂苷Rb 1(C 54H 92O 23)不得少于0. 20%。
表2- 3 人参梯度洗脱表
【实训报告与考核】
1.绘人参横切面简图及粉末特征图;记录性状与理化鉴定结果。
2.将综合鉴定结果与药品标准相比较,判断供试品是否符合规定。
3.书写药品检验报告书。