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实训14 甘草的鉴定
【实训目标】
熟练掌握甘草的性状、显微与理化鉴别方法;学会依据国家药品标准,综合鉴定甘草的真伪优劣;学会书写检验报告书。
【实训准备】 1.实训材料
甘草为豆科植物甘草 Glycyrrhiza uralensis Fisch.、胀果甘草 Glycyrrhiza inflata Bat.或光果甘草 Glycyrrhiza glabra L.的干燥根及根茎。甘草药材、甘草粉末、甘草永久制片、甘草对照药材、甘草酸单铵盐对照品、甘草苷对照品、甘草酸铵对照品。
2.实训器具
显微镜、回流提取装置、紫外分析仪、点样器、硅胶G薄层板、展开缸、电吹风、紫外光灯、高效液相色谱仪、分析天平、标准药筛筛、具塞锥形瓶、超声处理器等。
3.实训试剂
稀甘油、水合氯醛试液、乙醚、甲醇、正丁醇、1%氢氧化钠溶液、乙酸乙酯、甲酸、冰醋酸、蒸馏水、10%硫酸乙醇溶液、十八烷基硅烷键合硅胶、乙腈、0. 05%磷酸溶液、70%乙醇等。
【实训内容及步骤】 1.性状鉴别 (1)甘草:
呈圆柱形,长25~100cm,直径0. 6~3. 5cm。外皮松紧不一,红棕色或灰棕色,有明显的纵皱纹、沟纹及稀疏的细根痕,皮孔横长,两端切面中央稍下陷;根茎表面有芽痕。质坚实,断面略显纤维性,黄白色,粉性,具明显的形成层环纹及放射状纹理,有裂隙;根茎断面中央有髓。气微,味甜而特殊。
(2)胀果甘草:
根及根茎木质粗壮,有的分枝,表面灰棕色或灰褐色,外皮粗糙。质坚硬,木纤维多,粉性小。根茎不定芽多而粗大。
(3)光果甘草:
根及根茎质地较坚实,有的分枝,表面灰棕色,外皮不粗糙。皮孔细小而不明显。
2.显微鉴别 (1)甘草横切面:
木栓层为数列棕色细胞。栓内层较窄。韧皮部射线宽广,多弯曲,常现裂隙;纤维多成束,非木化或微木化,周围薄壁细胞常含草酸钙方晶;筛管群常因压缩而变形。束内形成层明显。木质部射线宽3~5列细胞;导管较多,直径约至160μm;木纤维成束,周围薄壁细胞亦含草酸钙方晶。根中心无髓;根茎中心有髓。
(2)甘草粉末:
淡棕黄色。①纤维及晶纤维:纤维成束,直径8~14μm,壁厚,微木化,周围薄壁细胞含草酸钙方晶,形成晶纤维;草酸钙方晶多见。②导管:具缘纹孔导管较大,直径至160μm,稀有网纹导管。③木栓细胞:多角形或长方形,红棕色,微木化。④淀粉粒:多为单粒,卵圆形或椭圆形,脐点点状。⑤棕色块状物:形状不一。
3.理化鉴别 (1)薄层色谱:
①供试品溶液的制备:取本品粉末1g,加乙醚40ml,加热回流1小时,滤过,弃去醚液,药渣加甲醇30ml,加热回流1小时,滤过,滤液蒸干,残渣加水40ml使溶解,用正丁醇提取3次,每次20ml,合并正丁醇液,用水洗涤3次,弃去水液,正丁醇液蒸干,残渣加甲醇5ml使溶解,即得。②对照药材溶液的制备:取甘草对照药材1g,同法制成对照药材溶液。③对照品溶液的制备:取甘草酸单铵盐对照品,加甲醇制成每1ml含2mg的溶液,即得。④薄层色谱试验:吸取上述三种溶液各1~2μl,分别点于同一用1%氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上,以乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水(15∶1∶1∶2)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,在105℃加热至斑点显色清晰,置紫外光灯(365nm)下检视。⑤结果判断:供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,应显相同颜色的荧光斑点;在与对照品色谱相应的位置上,应显相同的橙黄色荧光斑点。
(2)检查:
①水分(以烘干法测定)不得过12. 0%。②总灰分不得过7. 0%。③酸不溶性灰分不得过2. 0%。④有机氯农药残留量:六六六(总BHC)不得过千万分之二,滴滴涕(总DDT)不得过千万分之二,五氯硝基苯(PCNB)不得过千万分之一。⑤重金属及有害元素:按铅、镉、砷、汞、铜测定法测定,铅不得过百万分之五,镉不得过千万分之三,砷不得过百万分之二,汞不得过千万分之二,铜不得过百万分之二十。
(3)含量测定:
按高效液相色谱法测定。①色谱条件与系统适用性试验:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,以乙腈为流动相A,以0. 05%磷酸溶液为流动相B,按表2- 2中的规定进行梯度洗脱;检测波长为237nm。理论板数按甘草苷峰计算应均不低于5000。②对照品溶液的制备:取甘草苷对照品、甘草酸铵对照品适量,精密称定,加70%乙醇制成每1ml含甘草苷20μg、甘草酸铵0. 2mg的溶液,即得。③供试品溶液的制备:取本品粉末(过三号筛)0. 2g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入70%乙醇溶液100ml,密塞,称定重量,超声处理(功率250W,频率40kHz)30分钟,取出,放冷,再称定重量,用70%乙醇溶液补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。④测定:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,测定,即得。⑤结果判断:本品按干燥品计算,含甘草苷(C 21H 22O 9)不得少于0. 50%,甘草酸(C 42H 62O 16)不得少于2. 0%。
表2- 2 甘草梯度洗脱表
【实训提示】
甘草含有甘草甜素,为甘草酸的钾、钙盐,甘草酸水解得二分子葡萄糖醛酸和一分子甘草次酸。另含黄酮类化合物、生物碱类、无机元素等。
【实训报告与考核】
1.绘甘草根横切面简图及粉末特征图;记录理化鉴定结果。
2.将综合鉴定结果与药品标准相比较,判断供试品是否符合规定。
3.书写药品检验报告书。