第二节　研究方法及临床应用

病理学从研究方法上可分为人体病理学研究方法和实验病理学研究方法两部分。前者通过尸体剖验、活体组织检查和细胞学检查等所获得的材料对疾病做出最后诊断；后者则以疾病的动物模型或在体外培养的组织或细胞为材料进行医学研究。

一、人体病理学研究方法

1．尸体剖验

尸体剖验（autopsy）简称尸检，是指对死亡者的遗体进行病理解剖，其主要方法是通过大体和组织学观察死亡者全身各组织器官，结合生前的各种医学信息做出全面、准确的病理诊断，查明死因。尸检在临床医学和法医学方面都具有十分重要的意义，体现在：①验证临床诊断与治疗的正确性，总结经验教训，提高医疗技术水平；②积累大量而系统的病理资料，为科研、教学和临床服务；③深入认识疾病（某些传染病、地方病、流行病等）和发现新的病种；④确定死亡原因、判断死亡时间。由此可见，尸检是研究、认识和诊断疾病的重要手段和方法，也是法医学常用的侦破手段。但目前我国的尸检率还不高，而且有进一步下降的趋势，十分不利于我国病理学和整个医学科学的发展，因此要提高对尸检的认识，以更有利于疾病的研究和发展。

2．活体组织检查

活体组织检查（biopsy）简称活检，是指通过局部手术切除、内镜钳取和穿刺吸取等方法取出患者病变部位的组织进行病理检查（图1-1）。近年来由于各种内镜（如纤维胃镜、纤维结肠镜、纤维支气管镜等）和影像诊断技术的不断改进，不但可以直接观察某些体内肿瘤的外观形态，还可在其指引下准确地取材，进一步提高了早期诊断的阳性率。活体组织检查对及时诊断疾病、评价疗效、分析预后等都具有重要作用，尤其是对良、恶性肿瘤及某些疑难疾病的鉴别诊断具有决定性作用。必要时可做冷冻切片，快速诊断，为临床医生决定手术方式提供依据。因此，活体组织检查目前仍然是临床上重要的、常用的诊断方法之一。

★考点提示：临床上常用的检查方法

3．细胞学检查

细胞学检查是通过各种方法采集人体病变部位的细胞，制成细胞涂片，利用显微镜进行病理学观察，并做出细胞学诊断。常用的细胞学检查如下。

①脱落细胞学检查：如痰涂片，尿沉渣涂片，胸腔积液、腹水涂片及阴道分泌物涂片等。

②刷刮细胞学检查：如支气管内镜刷片、子宫颈刮片、食管拉网等涂片。

③穿刺细胞学检查：如甲状腺肿块穿刺、肝穿刺、淋巴结穿刺涂片。

④印片细胞学检查：如体表溃疡、新鲜切取组织等用玻璃片直接粘取病变细胞进行检查。

细胞学检查主要用于疾病诊断、健康普查、激素水平测定及为细胞培养提供标本等。

★考点提示：细胞学检查的概念

二、实验病理学研究方法

1．动物实验

动物实验是指在各种实验动物身上复制某些人类疾病的模型，有针对性地研究疾病的病因、发病机制及治疗效果等，动态观察其形态、功能和代谢的改变以及疾病的整个发展过程和临床表现，验证治疗效果等（图1-2）。动物实验可以弥补人体观察的不足和局限性，提供丰富的研究资料，为人类医学的发展作出了重要贡献。但是，由于动物和人类之间的存在差异，因此不能把动物实验的结果简单地运用于人体。

2．组织培养和细胞培养

将人体或动物体内取出的某种组织或细胞，在体外适宜的环境下进行培养，动态地观察在各种因素作用下细胞、组织发生的变化，来研究疾病的病因、发病机制、病理变化、治疗效果、预后等（图1-3）。近年来通过体外培养建立了不少人体和动物肿瘤的细胞系，对研究肿瘤细胞的分子生物学特性起到了重要作用。这种研究方法的优点是周期短、见效快、节省开支，体外实验条件容易控制，可以避免体内复杂因素的干扰。缺点是孤立的体外环境与复杂的体内整体环境有很大的不同，故不能将体外研究结果与体内过程简单地等同看待。

三、病理学常用的观察方法

1．大体观察

大体观察也称肉眼观察，是主要通过肉眼、各种衡量器具对所检标本的大小、形状、色泽、重量、质地、表面及切面、病灶特性及与周围组织的关系等进行细致的观察及检测的方法（图1-4）。大体观察能够了解病变的整体形态，是病理学检查必不可少的步骤，有经验的病理医师往往能够通过对病变部位的大体观察即可初步确定病变性质。

★考点提示：肉眼观察的方法

2．组织学观察

组织学观察也称镜下观察，是指从大体标本具有代表性的病变部位切取组织，制作成厚3～5μm的组织切片，并经过HE或特殊染色后，用光学显微镜观察其病变（图1-5）。组织学观察虽然是传统的病理学研究方法，但是到目前为止仍然是最基本、最可靠、最常用的病理学研究和诊断方法，具有不可替代的地位。

3．超微结构观察

运用透射、扫描电子显微镜对细胞的内部及表面超微结构进行更加细微的观察，即从亚细胞（细胞器）和大分子水平上了解细胞的病变。

4．组织化学和细胞化学观察

运用化学试剂与组织、细胞中某种化学成分起特异性反应而显色的方法，从而显示组织细胞中的化学成分，如蛋白质、酶类、核酸、糖类以及脂类等。组织化学和细胞化学观察对某些疾病有一定的诊断价值。

5．免疫组织化学检查

免疫组织化学检查是最近十多年来迅速发展起来的一门新兴技术，已被广泛运用于肿瘤研究和诊断。其原理是利用抗原与抗体的特异性结合反应来检测组织中的未知抗原或者抗体，主要是肿瘤相关抗原（肿瘤分化抗原和肿瘤胚胎抗原），借以判断肿瘤的来源和分化程度，协助肿瘤的病理诊断和鉴别诊断。目前已广泛用于疾病的诊断与鉴别诊断。

6．分子生物学技术

十余年来分子生物学肿瘤研究领域引起了一场革命。重组DNA技术、核酸分子杂交技术、聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR）和DNA测序等新技术在肿瘤的基因分析和基因诊断上已经开始应用。例如对恶性淋巴瘤，利用Southern印迹杂交技术和PCR方法，可以对样本淋巴组织中是否存在单克隆性的增生作出判断，从而协助形态学诊断。这些技术还被用于肿瘤的病因和发病学研究，使人们对疾病发生、发展规律的认识更深入，也使病理学的发展快速进入新时期。