（四）化学神经解剖学研究技术

1.酶组织化学技术　酶组织化学（enzyme histochemistry）技术是利用组织细胞内酶具有催化某种反应的特性来检测酶活性。显色原理是将组织切片置于含有特异性底物的溶液中孵育，底物经酶的作用形成初级反应产物，再与某种捕获剂结合，形成显微镜下可见的沉淀物。常用于神经解剖学研究的酶组织化学方法有乙酰胆碱酯酶组织化学染色和辅酶Ⅱ依赖性黄递酶（NADPH-d）组织化学染色等。

2.免疫组织化学技术　免疫细胞化学（immunocytochemistry，ICC）技术是应用免疫学原理，通过抗原和抗体的结合反应显示细胞内的抗原或抗体成分。将这种技术用于组织学研究则称为免疫组织化学（immunohistochemistry，IHC）技术。由于该方法特异性强和灵敏度高，特别是近年来免疫学不断发展，提纯抗原和制备标记抗体等技术不断提高，使IHC技术进展迅速、应用更加广泛，已成为神经解剖学的重要研究方法。常用的免疫组织化学方法包括免疫荧光细胞化学法和免疫酶法等，用这种方法可对细胞内的特定抗原、抗体进行定位和定量研究。

在神经解剖学的研究中，作为抗原的通常是神经组织内的蛋白、神经肽或酶，抗体为免疫球蛋白。大多数抗原-抗体反应物是不可见的，需要将抗体或免疫复合物与可以辨别的物质或荧光染料结合，再用组织化学方法显示此标记物，才能在光镜或荧光显微镜下进行观察。常用的标记物质有荧光染料、酶、铁蛋白、生物素、胶体金及同位素等，光镜免疫组织化学最常用的标记酶是HRP。

用免疫组化技术在同一张切片上显示两种或两种以上的抗原，以观察他们定位、形态和功能上的相互关系，或在相邻两张切片上各显示一种抗原，然后进行比较观察两种抗原是否共存在同一细胞内，可采用免疫组织化学双重染色技术。

3.原位杂交组织化学技术　简称原位杂交（in situ hybridization），是在一定温度和离子浓度下，将具有特异序列的单链探针通过碱基互补规则与组织细胞内待测的核酸结合，使得组织细胞中的特异性核酸得到定位，并通过探针上所标记的检测系统将其在核酸的原有位置上显示出来。标记的DNA或RNA为探针，可与组织切片、细胞或染色体标本中的待检DNA片段或mRNA进行杂交，然后显示标记物，从而分析待检核酸的分布和含量。利用此项技术可研究编码某种蛋白质的mRNA在胞质中的表达和各种基因在染色体上的定位。