实验二 制备坐骨神经-腓肠肌标本
实验目的
学习 制备坐骨神经-腓肠肌标本的方法。
实验原理
蛙或蟾蜍等两栖类动物的一些基本生命活动和生理功能与温血动物相近，而其离体组织所需要的存活条件比较简单，易于控制和掌握。因此在实验中常用蟾蜍或蛙坐骨神经-腓肠肌标本来观察兴奋性、兴奋过程和刺激-反应的一些规律以及骨骼肌的收缩特点等。坐骨神经-腓肠肌标本的制备方法是生理实验中的一项基本操作技术。
实验对象
蟾蜍。
实验器材和药品
蛙类手术器械1套，蛙板，滴管，培养皿，任氏液，烧杯等。
标本制作方法
1.破坏脑和脊髓 取蟾蜍1只，用自来水冲洗干净。用左手持蟾蜍。持法是掌心向上，蟾蜍背部向上。以食指和中指根部夹持蟾蜍前肢，以无名指和小指根部夹住后肢，以拇指指尖抵在枕骨大孔后缘，右手持刺蛙探针从枕骨大孔垂直刺入，然后向前刺入颅腔，左右搅动捣毁脑组织；然后左手拇指轻轻抵压在蟾蜍背上，使脊柱伸直，将探针退到枕骨大孔处（但不要退出体外），再转向后方，刺入椎管捣毁脊髓。此时若蟾蜍的四肢松软即表示脑脊髓已完全被破坏，否则应按上法再行捣毁脊髓（图2-1）。
图2-1 破坏蟾蜍脑脊髓的方法
2.剪去躯干上部及内脏 左手握蟾蜍后肢，用拇指和食指持住骶骨，使蟾蜍头与内脏自然下垂，右手持组织剪，在骶髂关节水平以上0.5～1cm处剪断脊柱，沿两侧剪除一切内脏及头胸部（注意勿损伤坐骨神经），仅留下后肢、骶骨、脊柱及由它发出的坐骨神经（图2-2）。
3.剥皮 左手用镊子持脊柱断端（注意不要压伤神经），右手捏住皮肤断端，向下牵拉，剥掉全部后肢皮肤，将标本背面向上放在预先滴有任氏液的瓷砖上（图2-3）。
图2-2 剪除躯干上部及内脏
图2-3 剥皮
4.清洗器械 将手及用过的剪刀、探针等器械洗净，完成后面的步骤。
5.分离两腿 用组织镊从背腹两侧夹住脊柱，将标本尾部稍翘起，用组织剪由尾侧向头侧剪去向上突出的尾骨（注意勿损伤坐骨神经）。然后沿正中线，用组织剪将脊柱分为两半，并从耻骨联合中央剪开两侧大腿，这样两腿即完全分离。将两腿浸于任氏液中。
6.制作坐骨神经-腓肠肌标本 取一腿放于蛙板上。
（1）游离坐骨神经：先将标本腹面向上，用玻璃分针沿脊柱侧分离游离坐骨神经。将发出坐骨神经处的脊椎骨连同神经与周围的骨骼、肌肉离断，然后将标本背侧向上放置，把梨状肌及其附近的结缔组织剪断，再循坐骨神经沟（股二头肌及半膜肌之间的裂缝处）找出坐骨神经的大腿部分，用玻璃分针顺着神经走行方向小心剥离，然后左手持镊子提起连接着坐骨神经的脊椎骨，右手持眼科剪从脊柱根部开始向下分离坐骨神经，剪断所有神经分支，将神经一直游离至腘窝为止（图2-4）。
（2）完成坐骨神经-小腿标本：将游离干净的坐骨神经搭于腓肠肌上，在膝关节周围用粗剪剪掉大腿肌肉，并用粗剪将股骨刮干净，然后在股骨中部剪去上段股骨，即完成坐骨神经-小腿标本（图2-5a）。
（3）完成坐骨神经-腓肠肌标本：将上述坐骨神经-小腿标本在跟腱处穿线结扎后，在其外端剪断跟腱。游离腓肠肌至膝关节处。在膝关节以下，将小腿其余部分全部剪断，即制成坐骨神经-腓肠肌标本（图2-5b）。
图2-4 坐骨神经分离暴露后的位置
图2-5 坐骨神经-小腿标本及坐骨神经-腓肠肌标本
7.用锌铜弓检查标本 用锌铜弓两极接触坐骨神经，如腓肠肌发生明显而灵敏的收缩，则表示标本的兴奋性良好，即可将标本放在任氏液中，以做实验之用。
注意事项
（1）在制备标本时，避免用金属器械夹持神经干和腓肠肌。
（2）在分离神经时，注意认清神经在肌肉之间的走行，不要乱剪。周围的结缔组织要剥干净。
（3）在制备标本过程中，要随时用任氏液湿润神经和肌肉，以防止干燥。
（4）在制备标本过程中，不能使动物皮肤的分泌物和血液等污染神经和肌肉，更不能用自来水冲洗，以免影响组织的功能。
思考题
（1）通过制备坐骨神经-腓肠肌标本，您对生理学实验有何感想？
（2）损毁脑和脊髓后的蟾蜍或蛙有何表现？