第4节　血液分析仪及其临床应用

考纲要求

①血液分析仪的检测原理、检测参数；②血细胞直方图及临床应用；③仪器性能评价及干扰血细胞分析仪检测的因素。

复习要点

一、概述★

20世纪50年代初，电子血细胞计数仪开始应用于临床，随着电子技术、流式细胞术、激光技术、单克隆抗体、计算机等高科技在血细胞分析仪上的应用，血液分析仪的研制水平不断提高，检测原理不断完善，测量参数不断增多。现代血液分析仪具有下列特点。

（1）自动化程度越来越高　分析通过条形码识别、自动运输装置、自动混匀、自动进样、自动检测、自动报告、自动清洗、自动涂片，形成了模块化自动化血液分析流水线。

（2）提供参数越来越多　能提供18～40多个参数，如有核红细胞数、淋巴细胞亚群数。

（3）精密度越来越高　采用定容计量、定时监控、三次平均法计数、延时计数等使精密度大大提高。

（4）速度越来越快　每小时可分析50～150份样本。

（5）强大的质控功能　有自动记录质控结果、可供选择的质控规则、自动绘制质控图、失控报警、患者结果浮动均值和患者结果Delta核查和报警等功能。

（6）智能化程度越来越高　能够提供简明直观的直方图或散点图、提示异常结果报警信号、备有专家诊断系统和远程会诊等功能。

二、检测原理

1.电阻抗法血液分析仪检测原理★★★

（1）电阻抗法血细胞计数原理（库尔特原理）　容器感应区内电阻增高，引起瞬间电压变化形成脉冲信号，脉冲振幅越高，细胞体积越大；脉冲数量越多，细胞数量越多，由此得出血液中血细胞数量和体积值。

（2）白细胞分类计数原理　经溶血剂处理的、脱水的、不同体积的白细胞通过小孔时脉冲大小不同，将体积为35～450fL的白细胞分为256个通道：淋巴细胞位于35～90fL的小细胞区；粒细胞（中性粒细胞）位于160fL以上的大细胞区；单核细胞、嗜酸粒细胞、嗜碱粒细胞、原始细胞、幼稚细胞等位于90～160fL的单个核细胞区，又称为中间型细胞。仪器根据各亚群占总体的比例，计算出各亚群细胞的百分率，并同时计算各亚群细胞的绝对值，显示白细胞体积分布直方图。

（3）血红蛋白测定原理　血红蛋白与溶血剂中的某些成分结合形成一种血红蛋白衍生物，在特定波长（530～550nm）下比色，吸光度与稀释液中的Hb含量成正比，最终显示Hb浓度。氰化钾的溶血剂与血红蛋白作用后形成氰化血红蛋白，其最大吸收峰接近540nm。

2.光散射法血液分析仪检测原理★★★

（1）光散射法白细胞计数和分类计数　包括激光与细胞化学法；容量、电导、光散射（VCS）法；电阻抗与射频法；多角度偏振光散射（MAPSS）法。

（2）光散射法红细胞检测原理　低角度（2°～3°）光散射能测量单个红细胞体积，高角度（5°～15°）光散射能测量单个红细胞血红蛋白浓度，得出MCV、MCH、MCHC值，并显示红细胞散射图、单个红细胞体积和血红蛋白含量直方图。

（3）光散射法血小板检测原理　高角度（5°～15°）光散射能测量细胞折射指数（RI）低角度（2°～3°）光散射能测量细胞大小。在二维散射图上得出血小板数量和相关参数。

（4）网织红细胞计数原理　利用新亚甲蓝使网织红细胞RNA着色，加入使红细胞内Hb溢出的试剂，使其成为“影细胞”，然后采用VCS原理，得出网织红细胞数和相关参数；也可利用碱性槐黄O等荧光染料与网织红细胞内的RNA结合，以波长488m氩氖激光束为激光源照射网织红细胞，得到前向散射光强度（细胞体积大小）和荧光强度（胞质内RNA多少），形成二维显示散点图，得出网织红细胞数和相关参数。

三、检测参数

1.检测参数★★

常见血液分析仪检测报告的术语和英文缩写词见表1-5。

2.检测结果的表达形式及其参考值与复核的标准★

检测结果的表达形式及其参考值与复核的标准见表1-6。

四、血细胞直方图

1.白细胞直方图★★★

血液分析仪提供细胞体积分布图形，横坐标为细胞体积，纵坐标为不同体积细胞的相对频率，称为细胞直方图。正常白细胞直方图在35～450fL范围将白细胞分为3群：左侧峰又高又陡为淋巴细胞峰，最右侧峰又低又宽为中性粒细胞峰，左、右两峰间的谷区较平坦为单个核细胞峰。白细胞直方图变化的部分原因表1-7。

2.红细胞直方图★★★

正常红细胞直方图在36～360fL分布两个细胞群体：从50～125fL区域有一个两侧对称、较狭窄的曲线，为正常大小的红细胞；从125～200fL区域有另一个低而宽的曲线，为大红细胞和网织红细胞。当红细胞体积大小发生变化时，峰左移或右移，或出现双峰。

3.血小板直方图★★★

正常血小板直方图，在2～30fL分布，呈左偏态分布，集中分布于2～15fL。当有大血小板、小红细胞、血小板聚集时，直方图显示异常。

五、方法学评价

1.仪器性能的评价★★

1989年，ICSH公布了用于评价血液分析仪性能、优点和局限性的《含白细胞分类、网织红细胞计数和细胞标志检测的血液分析仪评价指南》。仪器性能评价内容见表1-8。

（1）样本要求　血液样本要求在采集后4h内进行处理，并需要各种类型的样本，以反映血液中各种成分质和量的变化（表1-9）。

（2）性能评价

①稀释效应 受倍比稀释影响的参数，用同源乏血小板血浆稀释比容细胞，得到各种浓度如100%、90%、80%、20%、10%，评价稀释度与参数之间的线性关系，理想情况下，线性范围越宽越好，回归线应通过原点。不受稀释效应影响的参数，如红细胞平均指数，不受稀释度影响，理论上应为一条水平回归线。

②精密度 包括批内、批间精密度和总精密度。批内和批间精密度，是对同一批样本（批内或重复精密度）或二至多批样本（批间精密度）的重复测定，用CV值表示。理论上，精密度研究样本应覆盖整个病理范围，包括高、中、低值，进行重复测定，采用双因素方差分析进行批内、批间精密度评价。批间精密度受仪器校准和仪器漂移的影响。总精密度，总重复性由批内、批间精密度和携带污染结果得出。实验时从一个较大范围中随机抽取样本，并在几小时内测定，采用单因素方差分析进行评价。若总精密度评价在较长时间内完成，样本贮存和稳定性也是重要影响因素。

③携带污染 在运行临床样本前，必须对高值和低值样本的携带污染进行评价，保证交叉测量时仪器结果的稳定性。方法是连续测试高值样本3次（i1、i2、i3），随后立即连续测试低值样本3次（j1、j2、j3），按下列公式计算：携带污染率=（j2-j3）/（i3-j3）×100%。

④相关性 是仪器测定结果与常规方法相比的满意程度。采用大量的、未经选择的、覆盖所有预期范围的样本，用图形表达方式显示被评估仪器（y轴）和常规方法（x轴）测定结果的差异，采用配对t检验进行统计分析。

⑤准确度 是“估计值与真值之间的一致性”。真值由决定性方法或参考方法获得。

⑥样本老化 是采集静脉血样本，观察随时间增加测定结果的变化量。采集10份样本，5份为正常，5份为异常，样本分别贮存在室温和4℃，并在0h、30min、1h、2h、3h、4h、5h、6h、12h、24h、48h和72h内测试。以百分比或绝对值时间作图，观察被测参数的变化。

⑦样本异常干扰物和敏感性：在相关性研究中，应测试大量的非选择性样本，若有必要可对异常样本或已知干扰物样本进行特殊研究。

2.干扰血液分析仪检测的因素★

见表1-10。

六、临床意义

1.部分检测参数的临床意义★★

（1）红细胞血红蛋白分布宽度（HDW）　反映红细胞内Hb含量异质性的参数，用单个红细胞Hb含量的标准差表示，正常参考值为24～34g/L。遗传性球形红细胞增多症时RDW、HDW明显增高，为小细胞不均一性高色素性贫血。

（2）血小板平均体积（MPV）　可以鉴别血小板减低的病因。MPV增高，见于外周血血小板破坏过多所致血小板减低。MPV减低，见于骨髓病变所致血小板减低。也可以评估骨髓造血功能恢复情况。局部炎症时，骨髓造血未抑制，MPV正常。败血症时，骨髓造血受抑制，MPV减低。白血病缓解时，MPV增高。骨髓造血衰竭，MPV和血小板计数持续减低。骨髓功能恢复时，MPV先上升，血小板计数随后上升。

（3）血小板分布宽度（PDW） PDW增大见于急性白血病化疗后、巨幼细胞贫血、慢性粒细胞白血病、脾切除后、巨大血小板综合征、血栓性疾病、原发性血小板增多症、再生障碍性贫血。PDW减低见于反应性血小板增多症。

（4）LFR和HFR　骨髓移植时，HFR增高提示有较多未成熟细胞从骨髓进入外周血，故HFR变化比网织红细胞计数变化具有更重要的意义。溶血性贫血时，Ret、LFR、HFR明显增高。肾性贫血时HFR上升、LFR下降、Ret正常。放疗和化疗时，长期化疗导致网织红细胞亚群发生变化，HFR、MFR减低早于LFR。骨髓恢复时，HFR、MFR又迅速上升。

（5）网织红细胞成熟指数（RM）　RMI=（MFR+HFR）FR×100，RM增高，见于溶血性贫血、特发性血小板减少性紫癜（ITP）、慢性淋巴细胞白血病（CLL）、急性白血病、真性红细胞增多症、再生障碍性贫血、多发性骨髓瘤。RM减低，提示骨髓衰竭和造血无效，见于巨幼细胞贫血。

（6）未成熟网织红细胞指数（IRF）　指未成熟网织红细胞与总网织红细胞百分比。未成熟网织红细胞体积较大，含RNA的量多。IRF可监测骨髓移植后恢复情况，IRF较中性粒细胞绝对值、网织红细胞计数更早反映骨髓细胞生成和骨髓移植成功。IRF比骨髓移植前增高>20%时，表示红系移植成功。IRF是骨髓移植成功最早、最灵敏的指标。IRF也可监测肾移植后红细胞生成情况，肾移植后，IRF增高比网织红细胞计数早7d，是肾移植成功较早、较灵敏的指标。

（7）单个网织红细胞血红蛋白量（CHr）　可用于鉴别缺铁性贫血和非缺铁性贫血，是缺铁性贫血治疗有效的早期指标，在珠蛋白生成障碍性贫血患者CHr也可减少。

2.红细胞直方图在贫血中的应用★★

（1）小细胞性贫血　RDW正常，红细胞主峰左移，分布在55～100fL，波峰在75fL处，基底较窄，为小细胞低色素均一性图形，见于轻型珠蛋白生成障碍性贫血。RDW轻度增高，红细胞主峰左移，分布在55～100fL，波峰在65fL处，为小细胞低色素和细胞不均一性图形，见于缺铁性贫血。RDW明显增高。红细胞显示双峰，小细胞峰明显左移，波峰在50fL处，大细胞峰顶在90fL处，基底较宽，为小细胞低色素不均一性图形，见于铁粒幼细胞性贫血、缺铁性贫血经治疗有效时。

（2）大细胞性贫血　RDW正常，红细胞主峰右移，分布在75～130fL，波峰在100fL处，为大细胞性图形，见于溶血性贫血、白血病前期、再生障碍性贫血、巨幼细胞贫血。RDW轻度增高，红细胞峰右移，基底增宽，分布在75～150fL，波峰在105fL处，为大细胞不均一性图形，见巨幼细胞贫血。RDW明显增高，红细胞峰右移，出现双峰，以100fL处为主，为大细胞不均一性图形，见于巨幼细胞贫血治疗初期。

（3）正细胞性贫血　RDW正常，红细胞分布在55～110fL，波峰在88fL处，为正常红细胞图形，见于慢性病贫血、急性失血、骨髓纤维化、骨髓发育不良。RDW轻度增高，红细胞分布在44～120fL，波峰在80fL处，为红细胞不均一性图形，见于血红蛋白异常、骨髓纤维化。RDW明显增高，红细胞分布在40～150fL，波峰在90fL处，为红细胞不均一性图形，见于早期或混合性营养不良。

考题回顾与同步练习

【例1】电阻抗法进行血细胞计数时，与脉冲信号振幅高低成正比的是

A.血细胞的数量　B.血细胞是否有核　C.血细胞的比密　D.血细胞体积大小　E.血细胞在计数孔移动的速度

【例2】电阻抗型血液分析仪的WBC直方图中，通道在160～450fL的白细胞主要是

A.中性粒细胞　B.嗜碱粒细胞　C.嗜酸粒细胞　D.单核细胞　E.淋巴细胞

【例3】血液有形成分中，数量最多的细胞是

A.粒细胞　B.红细胞　C.血小板　D.淋巴细胞　E.单核细胞

【例4】正细胞性贫血见于

A.再生障碍性贫血　B.慢性失血性贫血　C.地中海贫血　D.缺铁性贫血　E.慢性感染

【例5】骨髓移植后，监测骨髓造血功能恢复的重要参数是

A.网织红细胞计数　B.白细胞分类计数　C.白细胞计数　D.血小板计数　E.红细胞计数

【例6】流式细胞分析仪前向散射光用于检测

A.细胞的大小　B.细胞膜表面抗原　C.细胞质中的抗原　D.核膜上的抗原　E.样品中的碎片

【例7】血细胞分析仪血小板直方图的横坐标代表

A.血小板体积　B.血小板相对数量　C.平均血小板容积　D.血小板亚积　E.血小板体积分布宽度

【例8】白细胞直方图淋巴细胞峰与单核细胞峰左侧相连并抬高，最可能的原因是

A.有核红细胞　B.急性髓细胞白血病　C.慢性粒细胞白血病　D.异型淋巴细胞　E.未成熟的中性粒细胞

【例9】巨幼细胞贫血的红细胞直方图表现为

A.波峰左移、峰底变窄　B.波峰左移、峰底变宽　C.波峰右移、峰底变宽　D.波峰不变、峰底变宽　E.波峰不变、峰底不变

【例10】正常白细胞直方图细胞峰从左到右依次为

A.淋巴细胞、中性粒细胞、单核细胞　B.淋巴细胞、单核细胞、中性粒细胞　C.单核细胞、淋巴细胞、中性粒细胞　D.单核细胞、中性粒细胞、淋巴细胞　E.中性粒细胞、单核细胞、淋巴细胞

【例11】在白细胞直方图中，淋巴细胞峰左侧区域异常，可能是

A.异常淋巴细胞　B.中性粒细胞增多　C.嗜酸粒细胞增多　D.巨大血小板　E.浆细胞

【例12】白细胞直方图上，单个核细胞区不包括以下哪类细胞

A.大淋巴细胞　B.中性粒细胞　C.嗜酸粒细胞　D.嗜碱粒细胞　E.原始细胞

参考答案

1.D　2.A　3.B　4.A　5.A　6.A　7.A　8.D　9.C　10.B　11.D　12.B