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实训4 中药的组织制片与绘图
【实训目标】
熟练掌握中药的徒手制片法和表面制片法;学会中药的组织简图及详图绘制技术。
【实训准备】 1.实训器具
徒手切片器、生物显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、解剖针、擦镜纸、吸水纸、玻璃棒、培养皿、毛笔、单面刀片、火柴、酒精灯、纱布、离心管、恒温水浴锅等。
2.实训材料
小通草药材、薄荷茎、牛膝根、松花粉、海金沙、蒲黄、大青叶、五味子等。
3.实训试剂
稀甘油、甘油醋酸试液、水合氯醛试液、间苯三酚试液、浓盐酸、乙醇、蒸馏水、醋酐、硫酸、50%甘油、1%苯酚、品红甘油胶等。
品红甘油胶制法:取明胶1g，加水6ml，浸泡至溶化，再加甘油7ml，加热并轻轻搅拌至完全混匀，用纱布过滤至培养皿中，加碱性品红溶液(碱性品红0. 1g，加无水乙醇600ml及樟油80ml，溶解)适量，混匀，凝固后即得。
【实训内容及步骤】 (一)徒手制片法
采用徒手制片法制作药材的横切片或纵切片，操作简便、迅速，制成的切片能保持其细胞内含物的固有形态，便于进行各种显微化学反应。
1.药材的预处理 (1)切块或段:
先将需观察的部位，切成适当大小的块或段，一般以宽1cm、长3cm为宜。
(2)软硬度调整:
软硬适中的药材可直接进行切片;质地坚硬的药材可放在吸湿器(即玻璃干燥器底部盛蒸馏水并滴数滴苯酚防霉，上部瓷板上放置药材吸湿)中闷润，或在水中浸泡或略煮，使其软化后再切片;过于柔软的材料，可将其浸入70%～95%乙醇溶液中，约20分钟变硬后再切片。
(3)支持物选择:
对于细小的种子或柔软而薄的叶类药材，不便直接手持切片，可选用适宜的支持物进行切片。如细小的种子类药材可放在软木塞或橡皮片中(一侧切一窄缝，将种子嵌入其中)进行切片;叶类药材可夹持在质地松软的小通草中进行切片。
2.切片
选取已软化的药材，用左手拇指和食指夹持材料，中指托住药材底部，使药材略高出食、拇二指;用右手持刀片，自左向右移动手腕，动作要轻而快，力求切片薄而完整，操作时材料的断面与刀口需常用水或50%乙醇溶液湿润。
3.装片
将切好的薄片，用毛笔小心地移入盛有清水或50%乙醇溶液的培养皿中浸泡，取载玻片滴加稀甘油或其他试液，用镊子或毛笔将切片移于其上，再滴加稀甘油，盖片镜检;也可将薄片滴加水合氯醛液加热透化，再滴加稀甘油，盖片镜检。加盖玻片时，应尽量避免产生气泡。
(二)表面制片法
将供试品(大青叶、五味子)湿润软化后，剪取欲观察部位约4mm 2，一正一反置载玻片上，或撕取叶片、萼片、花冠、果皮、种皮制成表面片，加适宜试液，或加热透化后以稀甘油装片观察。
(三)花粉粒与孢子制片
取松花粉、海金沙及蒲黄(干燥供试品可浸于冰醋酸中软化)，用玻璃棒研碎，经纱布过滤至离心管中，离心，取沉淀加新配制的醋酐与硫酸(9∶1)混合液1～3ml，置水浴上加热2～3分钟，离心，取沉淀，用水洗涤2次，取沉淀少量置载玻片上，滴加水合氯醛试液1～2滴，盖上盖玻片，观察;或加50%甘油与1%苯酚各1～2滴，用品红甘油胶封片观察。
(四)组织绘图技术
绘图方法包括徒手绘图、网格绘图、描绘器绘图和投影绘图等方法。重点练习徒手绘制组织简图及详图。要求比例正确，形态逼真，结构清楚，线条及细点粗细均匀，明暗一致。
1.徒手绘图法
选择典型的显微标本片和结构，仔细观察各部位的形状、结构及比例关系，用色淡的铅笔(2H或4H)，按照显微图像的比例关系画出轮廓草图，经反复对照修改后，再用色深的铅笔(HB或2B)绘出修改图。
2.组织简图绘制法
组织简图即用代表符号画成较简明的组织构造图，能清晰地表示出各组织和某些特征排列的位置、分布情况及比例关系，以了解该器官组织构造的全貌。组织简图各部位表示符号如图1- 2所示。
图1-2 组织简图各部位表示符号
绘图步骤:①将组织标本片置于显微镜下观察，用铅笔将图像的各部位轮廓画出。②按照规定的表示符号绘出各部位的重要特征(如厚壁组织、分泌组织、维管束等);准确表示组织中各部位的范围、界限及重要特征的所在位置。③将各部位依次向右方引出直线，标上图注，图下注明各部分名称及放大倍数。
3.组织详图绘制法
将显微镜下观察的组织、细胞及其内含物的真实形态、大小等特征，如实地绘制到画面上的图形，称为组织详图。绘图步骤同简图绘制法，应注意薄壁组织用单线条表示，厚壁组织用双线条表示。
【实训提示】
1.在药材预处理时应避免影响欲观察的显微特征。如观察菊糖、黏液等特征时，不可与水接触，以免特征溶解消失;观察挥发油、树脂等特征时，则不可与高浓度乙醇或其他有机溶剂接触。
2.用水合氯醛试液透化处理时，加热温度不宜过高，以防水合氯醛试液沸腾，将组织中带入气泡。
【实训报告与考核】
绘薄荷茎、牛膝根横切面简图及详图;绘松花粉、海金沙、蒲黄整体形态图;绘大青叶、五味子表面特征图。