1.1.1 ELISA技术的实验原理

ELISA包括直接法、间接法、双抗夹心法、竞争法及抗酶抗体法等几种类型。本节主要介绍比较常用的间接法、双抗夹心法和竞争法的基本原理。

1．间接法

该法是用来检测待测抗体最常用的方法。具体原理为将已知抗原吸附于固相载体上，加入待测样品（如含有待测抗体的动物血清），待测抗体与抗原结合，洗涤未结合抗体，再加入酶标二抗（用酶标记的能够特异性识别结合待测抗体的第二抗体），形成抗原-待测抗体-酶标二抗复合物，当进一步在反应体系中加入酶的反应底物后，有色产物的形成量与待测抗体的量成正比。实验原理如图1-1所示。

图1-1 间接法ELISA实验原理

资料来源：钱旻主编《免疫学原理与技术》

2．双抗夹心法

此法用于检测待测抗原。假设待测抗原表面有多个抗原决定簇A、B、C等，首先将能特异性结合待测抗原上A抗原决定簇的抗体（简称抗体A）包被于固相载体，然后加入待测样品（如含有待测抗原的动物组织或器官的组织匀浆液），使抗原抗体特异性识别结合，洗涤未结合的无关抗原后，再加入酶标记的能特异性识别结合待测抗原上B抗原决定簇的抗体（简称抗体B），形成“抗体A-待测抗原-酶标抗体B”共同构成的复合物。当加入酶反应的底物后，有色产物的形成量与待测抗原的量成正比，如图1-2所示。

图1-2 双抗夹心法ELISA实验原理

资料来源：钱旻主编《免疫学原理与技术》

3．竞争法

竞争法既可用于检测抗原，又可用于检测抗体。以检测抗原为例，将能与待测抗原特异性结合的抗体包被于固相载体上，加入待测抗原和一定量的已知酶标抗原，使二者竞争性地与包被的抗体结合，如待测抗原的量大于酶标抗原，酶标抗原与包被的抗体结合得少，进而形成的标记复合物也少，反之亦然，因此最终有色产物的形成量与待测抗原含量成反比，如图1-3所示。

图1-3 竞争法ELISA实验原理

资料来源：钱旻主编《免疫学原理与技术》