第一章　现代分子生物学关键技术

第一节　限制性核酸内切酶

一、限制性核酸内切酶

限制性核酸内切酶能识别双链DNA分子内部特异的4～8个碱基对(base pair,bp),水解切断每条链的一个3',5'-磷酸二酯键,形成5'-PO 4末端和3'-OH末端。有的限制性核酸内切酶在不同的平面上切割DNA的两条单链,使两条链上都留下一段(2～6个核苷酸)伸出来的单链,这两段单链的碱基彼此互补,可再次形成氢键,使DNA重新环化,这种末端称为黏性末端。有的限制性核酸内切酶在同一平面上切割DNA的双链,切割后,两条单链的末端在同一平面上,称钝性末端(或平头末端)(见表2-1-1),钝性末端不能自行环化。无论黏性末端或钝性末端均必须在连接酶催化下才能在两个末端之间再次形成磷酸二酯键,使DNA片段真正稳定地连接起来。

二、限制性核酸内切酶的切点

至今限制性核酸内切酶有数百种,常用的有数十种。各种内切酶都有特异的切点和最适的作用条件,举例说明如表2-1-1。

表2-1-1　限制性核酸内切酶切点