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(二)实验室技术保障
1.迅速建立实验室运转机制与防控体系
2014年8月7日,中国疾控中心专门从事病毒学研究的病毒病预防控制所(简称“病毒病所”)正式启动埃博拉出血热疫情防控工作,成立了以武桂珍书记为组长的病毒病预防控制所埃博拉出血热疫情防控工作应急领导小组,下设综合协调组、实验室检测技术组(包括第一、二梯队)和实验室安全及保障组,同时成立了专家咨询组,以提供疫情应对工作的咨询、建议和对实验室检测结果进行讨论与分析等。
从8月7日起,中国疾控中心病毒病所的专家们夜以继日,先后组织制定了《埃博拉出血热病毒危害评估》、《埃博拉出血热实验室检测方案》(第一版)、《援塞实验检测技术方案》、《援塞开展实验活动所需设备、试剂耗材清单》等20余项技术方案。为进一步加强埃博拉病毒实验室检测的生物安全管理,避免操作疏漏产生生物安全隐患,病毒病所组织生物安全委员会及相关专家,对援塞临时固定实验室运行方案进一步细化,撰写了埃博拉病毒检测方法,埃博拉出血热相关标本采集、临时固定BSL-3接收和转运指南,移动BSL-3埃博拉出血热相关标本采集、接收和转运指南,接收英国实验室埃博拉出血热相关标本采集、接收和转运指南,埃博拉出血热相关标本实验活动意外应急预案,埃博拉实验室人员(样品灭活人员)个人防护标准操作程序,埃博拉实验室人员(PCR检测人员)个人防护标准操作程序,埃博拉实验室人员N95口罩和面屏个人防护标准操作程序,埃博拉实验室监督员的职责,埃博拉实验室人员配置方案等11项技术方案。
取得BSL-3实验室从事埃博拉病毒实验活动资格是开展埃博拉病毒检测及疾病预防控制的前提,2014年8月6日,病毒病所第一时间启动了实验活动申报及认可准备工作。工作人员加班连夜制定了埃博拉病毒风险评估和标准作业指导书,并紧急召开生物安全委员会对风险评估和SOP进行了修改。在向中国合格评定国家认可委员会和北京市卫生计生委提交认可及实验活动申请材料的同时,病毒病所还组织对即将开展埃博拉病毒实验活动的工作人员进行了生物安全培训。8月9~10日,中国合格评定国家认可委员会专家组和国家卫生计生委专家组先后进驻病毒病所,开展现场评审。8月13日,国家卫生计生委向病毒病所颁发了实验室认可证书及实验活动资格证书,病毒病所仅用了一周的时间完成了埃博拉病毒实验活动从申请到评审直至获得证书的全部流程,成为全国第一家获得从事埃博拉病毒实验活动资格的单位,为病毒病所从事埃博拉病毒检测及疾病预防控制奠定坚实的基础。
2014年9月2日,研究人员在埃博拉实验室工作
2.研发埃博拉病毒核酸检测试剂盒
埃博拉出血热是一种严重的急性传染病,主要通过直接接触传播,有效防控疫情扩散需做到“五早”。实验室检测是病例确诊的主要依据,实用方法包括病毒核酸、抗原和抗体检测。核酸检测是目前早发现、早诊断的最主要检测方法。
西非埃博拉疫情发生后,中国疾控中心李德新教授率领的团队率先研制出了埃博拉病毒核酸、抗原和抗体检测试剂。其中“埃博拉病毒扎伊尔型核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)”,适合埃博拉出血热疫情防控的需要,同时检测核蛋白和糖蛋白两个基因靶标,增加病例筛查时的敏感性和在病例管理时,降低了假阴性的发生。经与中山大学达安基因股份有限公司合作,2014年8月在国内完成了所有阴性临床标本和模拟阳性标本的检测。2014年9月在法国巴斯德研究所世界卫生组织病毒性出血热参比实验室开展比较性验证研究,检出效果与法国巴斯德所世界卫生组织病毒性出血热参比实验室UBIVE的荧光RT-PCR核酸检测试剂盒的效果一致,并且检出限更低。通过中国疾控中心援塞检测队在塞拉利昂完成了挨博拉出血热疑似标本临床研究,于2014年11月首批获得国家医疗器械注册证书(注册证编号:国械注准20143402058),在西非和国内埃博拉出血热相关病例筛查检测中应用。在国内,包括病毒病所BSL-3级实验室在内的13家有埃博拉病毒相关样本检测资质的实验室应用了该试剂开展实验室筛查检测,为确保国内国际两线有效应对埃博拉出血热疫情发挥了至关重要的作用。
2014年11月27日,中国疾控中心病毒病所研发的埃博拉出血热核酸和血清学检测试剂
埃博拉病毒抗原和抗体检测试剂盒,包括胶体金法埃博拉病毒抗原检测试剂盒、酶联免疫法埃博拉病毒抗原检测试剂盒、酶联免疫法埃博拉病毒IgM抗体检测试剂盒和酶联免疫法埃博拉病毒IgG抗体检测试剂盒,与北京万泰生物药业股份有限公司合作,完成了所有阴性临床标本和模拟阳性标本的检测。病毒病所在法国巴斯德研究所参比实验室进行评价,均可特异性检出埃博拉病毒相关样本,为快检试剂的研发奠定了良好基础。
“宝剑锋从磨砺出,梅花香自苦寒来”。中国疾控中心病毒病所能够短时间内推出一整套埃博拉出血热实验室检测试剂,源自多年来在人才培养、技术领域的积累以及国家对疾控事业投入的增加,是国家疾控中心根据疾控事业的需要,针对潜在威胁大,存在输入风险的病原体,在没有样本没有参考品的条件下,从零开始,潜心研究的结果。
3.组织实验室培训与演练组建专业梯队
中国疾控中心分多批次、系统完成对所有埃博拉实验室检测人员的培训工作,快速建立起专业团队。
中国疾控中心分别完成对所有埃博拉实验室检测人员的应急演练工作,演练包括:防护服穿脱、正压呼吸装置使用、实验室事故应急处理、应急箱使用、急救箱使用、样本接收、消毒、分装、灭活和实验活动(核酸检测和血清检测)实操、结果复核与上报等。演练同时对埃博拉实验室检测试剂进行了评价与分析,包括:同时检测2个不同靶标的实时定量RTPCR检测试剂、常规PCR检测试剂、病毒抗原检测试剂、病毒IgM抗体和IgG抗体检测试剂等。进而开展试剂制备与攻关工作,扩大埃博拉病毒实验室检测试剂储备,包括核酸检测用引物、探针和血清学检测用抗原等。通过开展实战演练,优化、完善了工作细节与应对流程。
中国疾控中心以国家实验室为支点,完成对各省级疾控中心、各传染病重大专项实验室责任单位和部分重点口岸城市疾控中心的培训工作,有效提高我国应对埃博拉防控的整体能力和技术水平。完成埃博拉病毒检测技术及个人防护培训专业技术人员300余人次,并制作完成《埃博拉病毒检测及个人防护》教学片,在全国实验室人员培训中发挥了重要的作用。
为抗击埃博拉疫情,切实做好相关实验室检测工作,中国疾控中心于2015年1月和3月分别开展为期两周的“埃博拉病毒检测培训班”,培训内容包括:相关法律法规介绍与交流;个人防护设备的使用;手套箱的操作理论和使用维护;埃博拉病毒检测风险评估;埃博拉病毒检测理论与实际操作SOP;核酸提取仪和荧光定量PCR仪的安装、调试和使用等。培训班为所有实验室检测工作人员提供了全方位、实战模拟培训,确保队员能够安全、高效地开展样本检测工作。
2014年10月11日,专家对队员们个人防护服穿脱进行点评
2014年12月11日,监督员在穿脱防护服过程中起到了引导、监督的作用
2014年12月8日,病毒病所武桂珍书记现场讲解埃博拉出血热病毒检测技术要点
4.紧急启动应急采购,及时保障前方实验室运转
为保障前方实验室的正常运转,中国疾控中心第一时间启动了物资应急采购,做好援非抗疫物资的准备。
2014年11月8日,队员们在一起搬运援非物资
由于任务急、时间紧,在实验室物资清单确定、实验室相关材料制作、个人防护和消毒物品采购以及危险品运输等环节均存在众多挑战。工作人员克服种种困难,根据实验室检测预算和实际需求,最终确定固定生物安全实验室开展埃博拉病毒检测工作所必需的物资,包括生物安全用品、实验用品(含危险化学品)、部分大型仪器设备和办公用品等,并反复确定物资中每种物品的数量、预算单价、型号,确保万无一失。中国疾控中心先后进行了两次物资运输的招标(普货和危险品),确保了实验室物资的运送的规范、安全、及时。在随后的物资出发前的接收、清点、登记、危险品鉴定、出入境检验检疫局的卫检审批、航空货运打包、清关、装车和运送至北京天竺综合保税区入库的BGS库的过程中,都留下了疾控人忙碌的身影。他们放弃周末、节假日和晚上的休息时间,齐心协力,不辞辛劳,克服种种困难,圆满完成了实验室三批物资共90件,近10吨的物资的采购、筹备和运输任务,为援非抗疫工作提供了坚实的物资保障。
2015年1月19日,将第三批援塞公共卫生培训物资送至北京天竺综合保税区
2014年9月6日,中国疾控中心开始制定塞拉利昂固定BSL-3实验室中所需的检测设备、消毒用试剂、个人防护装备、生物安全相关耗材等BSL-3实验室运行所需要的清单,并按照工作半年的工作量估算所需试剂和耗材的数量、经费预算。针对国内很多厂商没有现货储备的物资,病毒病所武桂珍书记亲自与仪器试剂的厂家销售负责人谈话,说明事情的重要性,争取生产厂家的支持,紧急与国外总公司联系,将销售到其他国家的货物发到中国。1月14日前,所有供应商均在期限内将货物运到,这批货物为可维持实验室每天检测100份样品,运行75天,极大支持了塞拉利昂固定BSL-3实验室的建设和运行。
在塞拉利昂固定BSL-3实验室正式运行后,前方工作人员根据后期工作的需要,提出追加一部分物资,可维持实验室运行到6月底,为了能赶上3月19日的包机,在1周内共采购了36万余元的物资,及时满足了前方的需求。