汉代张仲景在前人认识的基础上，结合临床实践，著《伤寒杂病论》，创造性地建立了中医辨证论治的理论体系，也从理、法、方、药方面系统地建立了血瘀证学说。提出了瘀血的概念，对血瘀的形成、临床表现、诊断、治疗都作出了较为详细的论述，总结出了不少行之有效的治疗方法和方药，是应用活血化瘀治疗多种疾病的开始，为活血化瘀疗法的发展奠定了重要基础。

他首创了望舌诊断血瘀的方法，并对瘀血的症状与脉弦有较为详尽的论述。《金匮要略方论·惊悸吐衄下血胸满淤血病脉证治第十六》：“病人胸满，唇萎舌青，口燥，但欲漱水不欲咽，无寒热，脉微大来迟，腹不满，其人言我满，为有瘀血”，明确指出舌青为有瘀血的表现，为后世舌诊的发展，特别是血瘀证舌诊的应用开创了先河；并采用大量虫类药物活血通络治疗血瘀证，如水蛭、虻虫、 虫等，为后世络病学说的发展奠定了基础。

仲景创制了诸多活血化瘀方治疗各种血瘀证，其活血化瘀治法灵活多变，不拘一格，而又严谨慎密，轻重缓解，独行间用，井然有序，至今为临床所效仿和应用。其中以当归四逆汤（当归、白芍、桂枝、通草、细辛、甘草、大枣）活血通脉，温经散寒，治疗“手足厥寒，脉微欲绝”；桃核承气汤由桃仁、大黄、桂枝、甘草、芒硝组成，活血清热治疗血热互结少腹的太阳蓄血轻证；抵挡汤（丸）由水蛭、虻虫、桃仁、大黄组成，治疗太阳蓄血重证；大黄牡丹汤由大黄、丹皮、桃仁、瓜子、芒硝组成，荡热逐瘀治疗热毒内聚，营血瘀结的肠痈。《金匮要略·疟病脉证并治第四》：“病疟，以月一日发，当十五日愈；设不差，当月尽解；如其不差，当如何？师曰：此结为癥瘕。名曰疟母，急治之，宜鳖甲煎丸”，以鳖甲煎丸攻补兼施、寒热并用、化痰消癥、理气活血治疗癥积；《金匮要略·五脏风寒积聚病脉证并治第十一》以旋覆花汤活血理气治疗肝着证：“肝着，其人常欲蹈其胸上，先未苦时，但欲饮热，旋覆花汤（旋覆花、葱、新绛）主之”；《金匮要略·血痹虚劳病脉证并治第六》：“五劳虚极羸瘦，腹满不能饮食……内有干血，肌肤甲错，两目暗黑，缓中补虚，大黄 虫丸主之”，以大黄 虫丸缓中补虚治疗“干血痨”。

对于妇科多种疾病，仲景大量采用了活血化瘀的治疗方法，为后世所遵从。如妇科癥积采用桂枝茯苓丸（桂枝、茯苓、丹皮、芍药、桃仁）消瘀化癥，妊娠腹痛绵绵用当归芍药散（当归、川芎、芍药、茯苓、泽泻、白术），妊娠胎动用当归散（当归、芍药、川芎、黄芩、白术），妊娠养胎用白术散方（白术、川芎、蜀椒、牡蛎）；产后腹痛瘀血实证用枳实芍药散（枳实、芍药）或下瘀血汤（大黄、桃仁、 虫）；妇人经带疾患如带下瘀血在少腹不去，少腹里急，暮即发热用温经汤（吴茱萸、当归、川芎、芍药、人参、桂枝、阿胶、生姜、丹皮、甘草、半夏、麦冬）；带下经水不利用土瓜根散（土瓜根、芍药、桂枝、 虫），经水不利用抵挡汤等。其中妇科妊娠腹痛兼下血用芎归胶艾汤（川芎、阿胶、当归、芍药、甘草、艾叶、地黄）治疗，可以认为是出血疾病用活血化瘀法治疗的肇始。

以上可以看出，张仲景对活血化瘀疗法的应用已经十分成熟，所涉及的药物、药方、病种、病症、治法均十分复杂多变。癥积、虚劳、痹证、膀胱蓄血、肠痈，各种疼痛、各种妇科疾病，甚至出血性疾病，仲景均提出了采用活血化瘀进行治疗的方法。即在仲景看来，有是证即用是法，只要疾病存在血瘀，就可以应用活血化瘀法进行治疗。