第一章 血片制备

一、血涂片的制备

制备合格优质的血涂片,是观察血细胞形态,血片分类和复检血涂片的重要一步。
所需要的材料:清洁且无油脂的载玻片;边缘光滑的推片,推片应小于载玻片的宽度,或下端有内向的切角;毛细管或塑料滴管。
1.用毛细管或塑料吸管吸取EDTA抗凝的外周血4~6μl,或者直接采集患者末梢血,将血滴滴至载玻片的一端约3/4处,有磨砂片头的玻片,可在接近磨砂片头的部位(图1-1)。
图1-1 在玻片一端滴一滴血
2.将推片接近血滴处,然后轻轻接触血滴并压在血滴上,使血液呈”一”字型展开,充满推片宽度(如果能做到边缘血量较少,中间血量稍多为最佳)(图1-2,图1-3)。
图1-2 将推片接近血滴
图1-3 用推片将血滴”一”字形展开
3.将推片与载玻片形成30°夹角,见图1-4,用均匀的速度将血向载玻片的另一端(尾部)推动。红细胞压积(HCT)发生变化时,应适当的调整推片与载玻片的角度(30°~45°)以及推动血液时的速度(图1-5)。HCT越高,角度越小,速度越慢;HCT越低,角度越大,速度越快。这样才能做到推制出的血涂片薄厚适中,油镜观察区域的血细胞形态舒展且分布均匀。标准的血涂片应做到头、体、尾分明,两边和两端留有空隙(图1-6)。
图1-4 推片与载玻片形成30°夹角
图1-5 向前推制血片
图1-6 头、体、尾分明的血片
4.推制好的血涂片迅速干燥。如果实验室所处地区空气湿度较大,可使用电风扇风干(切忌使用电吹风,以免过烫)。
5.如果载玻片有磨砂边,应标注该标本的患者姓名或编码。如果载玻片没有磨砂边,则用铅笔将该标本的患者姓名或编码写在血膜头部的最厚处。
6.有条件的单位,还可采用全自动血细胞分析仪流水线系统配备的制片染片机,制备标准的血涂片,其操作可参考仪器说明书或实验室SOP文件。仪器可将患者的编号、ID号或二维码打印在特定区域,以方便样本识别。图1-7为某品牌流水线上的血涂片染片机,图1-8为仪器制备的血涂片。
图1-7 自动血涂片染片机
图1-8 仪器制备的血涂片
7.还可使用半自动小型推片机制备血涂片(图1-9),该小型设备可一次性制备两张血涂片。①将玻片放置在推片机上,将5μl血液滴在玻片指定位置(图1-10);②向下压手柄,使得推片接触血滴,并使血滴呈一字型展开(图1-11);③松开手柄,推片向前移动,同时将血片推制好(图1-12);④完成一组血片推制后,应使用沾有盐水的棉签将推片上沾染的血液擦拭干净。
图1-9 半自动血片涂片机
图1-10 将血滴在玻片上
图1-11 压下手柄
图1-12 制备好的血涂片
8.血涂片各种效果和质量分析 进行细胞分类计数、形态观察、能否在血涂片中的某个部位查找到有价值的信息,这都与血涂片制备的优劣有很大关系。
图1-13 各种血涂片效果
图1-13中所示八种血涂片的优劣点分析如下:①这是一张头、体、尾分明,薄厚适中,两边、两端均留有空隙的标准血涂片;②血膜太短,体、尾交界处不分明,进行白细胞分类计数时,细胞形态不舒展,造成细胞形态不易辨认;③血膜头、体、尾不分明,薄、厚不均,且没有尾部,这样的血膜会造成细胞分布不均匀,很大程度上影响白细胞分类计数,体积较大的细胞,或者会对血常规结果造成影响的有价值的信息也不易查找到,这样的血涂片根本不能使用;④这张血涂片两边没有空隙,体积较大的细胞和有价值的信息也容易出现在血膜两边,不利于观察该部位;⑤血膜太薄,细胞密度小,白细胞分类计数时就要耗费更多的时间;⑥血膜太厚,细胞密度大,这种情况下,体尾交界处的细胞经常会叠摞在一起,难以细致的观察各种细胞形态;⑦“搓板”样的血涂片,在这样的血膜中,细胞分布不均,白细胞分类计数的结果会受到很大的影响,也属于不能使用的血涂片;⑧血膜略有倾斜,显然是操作人员推片时,手上力度不均匀造成的,这样的血膜对于血涂片复检,结果不会受到太大的影响,但血膜的外观不能达到完美。