牛膝

ACHYRANTHIS BIDENTATAE RADIX

本品为苋科植物牛膝Achyranthes bidentata Bl.的干燥根。主产于河南武陟、沁阳等地，河北、山西、山东、江苏等省亦产，为栽培品。冬季茎叶枯萎时采挖，除去须根及泥沙，捆成小把，晒至干皱后，将顶端切齐，晒干。其性平，味苦、酸。具有补肝肾，强筋骨，逐瘀通经，引血下行的功能[1]。

【主要成分】　主要含有糖类成分（如肽多糖ABAB、寡糖ABS），三萜皂苷类（如人参皂苷Ro，竹节参皂苷Ⅳa等）及甾酮类（如羟基促蜕皮甾酮、牛膝甾酮、红苋甾酮等）等活性成分。

【定性分析】　取本品粉末4g，加80％甲醇50mL，加热回流3h，滤过，滤液蒸干，残渣加水15mL，微热使溶解，通过D101型大孔吸附树脂柱（内径1.5cm，柱高15cm）上，用水100mL洗脱，弃去水液，再用20％乙醇100mL洗脱，弃去洗脱液，继用80％乙醇100mL洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加80％甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液。另取牛膝对照药材4g，同法制成对照药材溶液。再取β-蜕皮甾酮对照品、人参皂苷Ro对照品，加甲醇分别制成每1mL含1mg的溶液，作为对照品溶液。吸取供试品溶液4～8μL、对照药材溶液和对照品溶液各4μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水-甲酸（7:3:0.5:0.05）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

【含量测定】β-蜕皮甾酮[1]（高效液相色谱法）

（1）色谱条件与系统适用性试验　以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水-甲酸（16:84:0.1）为流动相；检测波长为250nm。理论板数按β-蜕皮甾酮峰计算应不低于4000。

（2）对照品溶液的制备　取β-蜕皮甾酮对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含0.1mg的溶液，即得。

（3）供试品溶液的制备　取本品粉末（过三号筛）约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加水饱和正丁醇30mL，密塞，浸泡过夜，超声处理（功率300W，频率40k Hz）30min，滤过，用甲醇10mL分次洗涤容器和残渣，合并滤液和洗液，蒸干，残渣加甲醇使溶解，转移至5mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。

（4）测定法　分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定，即得。

本品按干燥品计算，含β-蜕皮甾酮（C27H44O7）不得少于0.030％。

【现代研究】

穆海风等[2]建立同时测定怀牛膝中β-蜕皮甾酮、R-牛膝甾酮和S-牛膝甾酮3种成分含量的方法。色谱柱为Venusil XBPC18柱（250nm×4.6mm，5μm），流动相为0.1％甲酸-乙腈（84:16），检测波长为250nm，柱温40℃。

赵变等[3]采用HPLC同时测定怀牛膝中5-羟甲基糠醛和蜕皮甾酮的含量。采用SHIMADAUshim-packVP-ODS色谱柱（4.6mm×250mm，5μm），柱温30℃，流动相为乙腈-水（梯度洗脱），流速1.0mL/min，检测波长245nm和279nm。

张留记等[4]建立怀牛膝中β-蜕皮甾酮的HPLC含量测定和指纹图谱方法，以比较不同产地牛膝的质量差异。β-蜕皮甾酮在0.26～2.6μg线性关系良好（r=0.9994），平均回收率为100.29％（RSD=2.42％，n=6）。建立的怀牛膝药材HPLC指纹图谱标定了7个共有峰。

杨蝉等[5]采用硫酸-苯酚法显色后，用分光光度法测定牛膝中多糖含量，测定波长491nm。

成丹[6]采用原子吸收分光光度法测定牛膝中微量元素铁、锰、锌、铜、铝的含量。

孙晋鹏等[7]以柱前衍生化高效液相色谱法测定牛膝中齐墩果酸的含量。用对硝基苯甲酰氯作为衍生化试剂对齐墩果酸分子中的羟基进行苯甲酰化，以0.2％磷酸水溶液-乙腈（5:95）为流动相，在波长254nm处进行检测。

赵素霞等[8]采用高效液相色谱-蒸发光散射检测器分析法检测酒炮制的牛膝饮片中甜菜碱的含量，以探讨酒炙对牛膝甜菜碱含量的影响。